一.简介

A.细胞名称：小鼠肥大细胞瘤细胞(P815)

B.细胞来源：小鼠 肥大细胞；肥大细胞瘤

C.细胞形态：分悬浮，部分贴壁生长。贴壁细胞可用刮刀刮下下后继续悬浮生长

D.细胞数量：>1百万个

E.污染检测：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

F.包装规格：T25培养瓶或者1ml冻存管包装

G.完全培养基：89%DMEM＋10%优质FBS＋1%双抗

H.细胞背景描述: P815细胞吞噬小粒乳汁但不吞噬酵母聚糖或卡介苗。 没有抗体依赖的细胞毒作用。 硫酸右旋糖苷、LPS或PPD不能抑制细胞生长。 检测表明肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性。 在本库通过支原体检测。

J.细胞的发货方式：细胞发货运输可选择干冰运输或发送复苏存活细胞这两种方式

二.收到细胞后的处理：

1）收到细胞后的拍照:请检查冻存管或培养瓶的状况，若发现干冰已挥发干净、冻存管或培养瓶瓶盖脱落、冻存管破损或培养瓶有破损漏液溢出及细胞有污染等现象，请立即拍照与我们联系。

2）收到细胞后的保存以及处理：A.若收到的是干冰运输的细胞，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；B.若收到的是复苏存活的细胞，收到后应继续生长培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

3）在显微镜下检查细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，这样能够准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10×和20×物镜下，刚收到细胞时请立即给细胞拍照，（10×，20×）各拍照2-4张以及培养瓶外观拍照2-4张并留存，有必要时,这些照片可以作为日后售后的依据。

4） 观察完细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

5）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书上写的新配置好的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。

6）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出培养瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书上写的新配置好的完全培养基）。

7）注意：如果培养瓶装的是运输培养基（灌液培养基），是不能再用来培养细胞的，请换用按照说明书上写的新配置好的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。

三.细胞培养操作

A.培养基及培养冻存条件：

1） 完全培养基：89%DMEM＋10%优质FBS＋1%双抗。该细胞培养是按照半贴壁半悬浮细胞操作。

注意事项：复苏好的P815细胞通过普通快递寄出，细胞多数呈悬浮状态，可能有些许细胞贴壁。当您收到细胞后，请将全部细胞悬液离心后，加入10-15ml培养液将细胞沉淀重悬，移植到2个T25培养瓶内，继续培养。转移到离心管，贴壁的细胞经吹打脱壁后一并收集，离心1000rpm，5min。

传代周期：

以20万细胞/ mL密度开始培养，并在培养过程中维持细胞密度在10万细胞/毫升到100万细胞/mL。

传代比例：

以20万细胞/毫升密度开始培养，并在培养过程中维持细胞密度在10万细胞/ mL至100万细胞/ mL。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

B.复苏细胞、细胞传代、细胞冻存：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：

可以通过添加或替换新鲜培养基来维持培养。以2 X 10 5细胞/ mL 开始培养，并维持在1 X 10 5和1 X 10 6细胞/ mL之间。贴壁细胞可以通过刮擦回收。

3） 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存 冻存时收集悬浮细胞，贴壁细胞用细胞刮铲回收，离心重悬后按1×10⁶细胞/mL来冻存细胞。

注意事项：

1. 收到细胞后，请立即拍照；若发现干冰已挥发干净、冻存管或培养瓶瓶盖脱落、冻存管破损或培养瓶有破损漏液溢出及细胞有污染等现象，请立即拍照与我们联系。

2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

3.细胞用途：仅供科研使用。