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人肺癌细胞(NCI-H2228)

货号:JCM-H1208

价格:1700

.简介

A.细胞名称:人肺癌细胞(NCI-H2228

B.细胞来源:人 肺

C.细胞数量:>1百万个

D.污染检测:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

E.包装规格:T25培养瓶或者1ml冻存管包装

F.完全培养基:89% RPMI-164010%优质FBS1%

G.细胞背景描述: 人非小细胞肺癌细胞,患者不吸烟。细胞生长速度慢,传代一次时间为10-15天。每个批次均通过本库支原体检测,结果为阴性。在我库通过STR检测无误。STR鉴定结果为:Amelogenin: X; CSF1PO: 12; D13S317: 11; D16S539: 11,13; D5S818: 12; D7S820: 11; THO1: 7,8; TPOX: 11; vWA: 15,17

H.细胞的发货方式:细胞发货运输可选择干冰运输或发送复苏存活细胞这两种方式

 

.收到细胞后的处理:

1)收到细胞后的拍照:请检查冻存管或培养瓶的状况,若发现干冰已挥发干净、冻存管或培养瓶瓶盖脱落、冻存管破损或培养瓶有破损漏液溢出及细胞有污染等现象,请立即拍照与我们联系

2)收到细胞后的保存以及处理:A.若收到的是干冰运输的细胞,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;B.若收到的是复苏存活的细胞收到后应继续生长培养,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

3)在显微镜下检查细胞生长状态时,最好在低倍镜(45X物镜)下进行,这样能够准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10×和20×物镜下,刚收到细胞时请立即给细胞拍照,(10×,20×)各拍照2-4张以及培养瓶外观拍照2-4张并留存,有必要时,这些照片可以作为日后售后的依据。

4) 观察完细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h

5贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

6)悬浮细胞:T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出培养瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书上写的新配置好的完全培养基)。

7)注意:如果培养瓶装的是运输培养基(灌液培养基),是不能再用来培养细胞的,请换用按照说明书上写的新配置好的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议12传代 。

             

    

.细胞培养操作

A.培养基培养冻存条件:

1) 完全培养基:89% RPMI-164010%优质FBS1%

2) 培养条件 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度培养箱湿度为70%-80%

3) 冻存液90%血清,10%DMSO现用

B.复苏细胞、细胞传代、细胞冻存:

1) 冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%可进行传代培养

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子PBS润洗细胞1-2

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA培养瓶中T251-2mLT752-3mL置于37培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml10%FBS的培养基来终止消化 

3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行

3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例;

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml。2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。

 

注意事项:

1. 收到细胞后,请立即拍照;若发现干冰已挥发干净、冻存管或培养瓶瓶盖脱落、冻存管破损或培养瓶有破损漏液溢出及细胞有污染等现象,请立即拍照与我们联系

2. 所有动物细胞均视为潜在的生物危害性必须在二级生物安全内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

3.细胞用途:仅供科研使用。

 


注意

1. 收到细胞后,请立即拍照;若发现干冰已挥发干净、冻存管或培养瓶瓶盖脱落、冻存管破损或培养瓶有破损漏液溢出及细胞有污染等现象,请立即拍照与我们联系

2. 所有动物细胞均视为潜在的生物危害性必须在二级生物安全内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

3.细胞用途:仅供科研使用。